多肽修飾過程中常采用總體縮合策略、單元構(gòu)建策略以及天然化學(xué)連接

　　多肽修飾過程中，通常采用總體縮合策略、單元構(gòu)建策略以及天然化學(xué)連接。針對(duì)修飾過程中肽鏈的縮合與不同的修飾化基團(tuán)的結(jié)構(gòu)之間相互影響，常采用不同的策略。
 

　　1)總體縮合策略
 

　　總體縮合策略，是指將已制備的多肽鏈與目標(biāo)修飾劑催化結(jié)合，以避免肽鏈延長(zhǎng)過程中所用試劑對(duì)修飾劑與肽段連接效率的影響。以糖肽為例，在縮合過程中，先分別合成多肽和寡糖，再將多肽受體與寡糖供體縮合形成N-或O-糖肽。
 

　　此策略可避免肽鏈延長(zhǎng)過程中酸性去保護(hù)條件對(duì)O-糖苷鍵的影響。但是直接糖基化肽鏈中的絲氨酸或蘇氨酸還存在著很大的困難，嘗試了在樹脂上的固相糖基化反應(yīng)，合成采用端基連接烯丙基氨基甲酸酯的乙?；Ｗo(hù)葡萄糖，與樹脂上連有蘇氨酸殘基的三肽發(fā)生反應(yīng)，Pd催化切除后，發(fā)現(xiàn)以64%收率回收原料，而產(chǎn)物總收率只有4%。目前此策略主要應(yīng)用在糖基和天冬酰胺相連的N-鏈接糖肽中。
 

　　2)單元構(gòu)建策略
 

　　單元構(gòu)建策略是指先制備不同修飾基團(tuán)的單元，再將逐個(gè)單元催化耦合。在糖基化修飾過程中，由于氨基酸與糖之間的糖苷鍵在肽鏈延長(zhǎng)之前已形成，位點(diǎn)與立體選擇較易控制，目前已成為合成的常用方法，特別適用于固相合成法和合成含有多個(gè)糖基的糖肽。
 

　　此策略需預(yù)先在液相中合成糖基化氨基酸，已研制出葡萄糖、半乳糖、N-乙酰葡萄糖胺、GlcβGlc、Man、擬糖物、核糖等與天冬酰胺相連接的構(gòu)建單元。
 

　　引進(jìn)微波技術(shù)合成Fmoc-L-Asn(GlcAc4)，縮合時(shí)間從16～24h縮短至5min(100W，70℃)，極大地方便了N-糖肽的合成。在策略的選擇上，采用Fmoc固相合成策略研究磷酸化血管緊張素Ⅱ的合成，選擇N，N-二乙基-二叔丁氧基亞磷酰胺為磷酸化試劑。
 

　　總體磷酸化法選用側(cè)鏈羥基未保護(hù)的酪氨酸作為固相合成的單體進(jìn)行肽的合成。磷酸化單體Fmoc-Tyr(PO3But2)-OH為單體進(jìn)行肽的合成。
 

　　采用總體磷酸化法和磷酸化單體法都得到了所需要的磷酸化血管緊張素Ⅱ。采用總體法不但能夠得到磷肽，而且也得到了非磷酸化的多肽，但是磷酸化效率低，產(chǎn)率約為17%，粗品肽較難分離。
 

　　而單體法提供了更為直接的合成步驟，合成效率更高，副產(chǎn)物較少，而且產(chǎn)率可達(dá)到38%，因此認(rèn)為合成包含磷酸化酪氨酸的多肽采用磷酸化單體法更好。